清洁验证分析方法验证

清洁验证相关的分析方法一般包括分析方法验证与取样方法验证，清洁验证中选择一个合适的分析方法是非常必要的，适当的分析方法应能够充分检测相关残留物。可以从分析结果中得出什么结论也很重要（例如检测的是产品还是清洁剂，结果是否合格），检测结果决定了清洁方法是否可行或需要进一步改进。本章讨论的内容是怎样选择一个合适的测试方法，包括适用性和化学与微生物测试方法的信息，以及测试方法的验证。

分析方法验证
       
1. 专属性

专属性是指其他物质存在干扰的情况下，被分析物能准确可靠检测的能力。对于清洁验证来说，干扰物包括降解物、辅料、取样溶剂、取样棉签、清洁剂等干扰。

2. 准确度
准确度也称为真实度，指真实值或认可的参考值与测量值之间的相近程度，一般用回收率表示，综合回收率要求不低于75%，回收率的RSD要求不大于10%，将测定的回收率中最低值作为校正因子f，样品的测定结果除以校正因子表示样品的实际量。

3. 精密度
指在规定条件下对均质样品多次取样进行一系列检测结果的接近程度，精密度可从三个层次考查：重复性、中间精密度、重现性，精密度考察应使用均质的、可信的样品，如果得不到，可人为配制样品溶液进行研究。

4. 线性
分析方法的线性是指在给定的范围内，检测结果与样品中被分析物的浓度（量）成比例关系的能力。范围指能达到一定的准确度、精密度和线性，测试方法适用的试样中被测物的高、低限浓度或量

5. 范围
分析方法的范围是指样品中被分析物的较高浓度和较低浓度的一个区间，并已证实在此区间内，该方法具有合适的准确性、精密度和线性。浓度范围应达到残留物限度的50%~150%。

6. 检测限与定量限
检测限是指样品中的被分析物能被检测到的最低量，定量限是指能定量检测样品中被分析物的最低量。检测限和定量限可采用直观评价和信噪比的方法，或者采用响应值的标准差和斜率的方法进行验证。

7. 耐用性
耐用性是指试验参数适当的发生细小改变时，测量保持不受影响的能力，可用于说明正常使用时的可靠性。
耐用性测试是在改变其分析参数的条件下，分析方法的适用性，以HPLC方法为例典型变化的参数如下：
流动相PH值变化
流动相组分变化
柱温和流速变化

8. 溶液稳定性
样品在分析前放置于一定的储存条件下，可能会发生降解和变化，在这些情况下，需要考察被分析物的稳定性。使用同一份溶液，测定其预先选定的时间间隔里结果的差异，以此分析样品的稳定性

9. 系统适用性
定量检测时应制备2份对照品，对照品一致性检查不大于5%，对照品的RSD不超过10%。

取样回收率研究

取样回收率研究通常需要证明采用适当的分析方法和取样程序，可充分测量或量化设备表面的残留物。这些研究为残留物测量的取样以及分析方法建立提供了科学依据。它的目的是建立一个可重现的设备表面回收率。以下探讨三种类型的取样回收率：擦拭取样回收率，淋洗取样回收率以及“目检”回收率。对于擦拭以及淋洗取样而言，回收率研究可以作为分析方法验证的一部分，或者一旦确定分析方法能够检测溶液中残留物，可单独进行研究。取样回收率研究是实验室研究，需要不同被取样设备材质（如不锈钢、玻璃、PTFE 以及EPDM）试样，并在上面涂布待检测残留物。

1. 擦拭法回收率
擦拭回收率研究中，将已知浓度的残留物溶液均匀涂布在材质试样上，自然晾干，采用一定的擦拭方法进行取样，选用合适的溶剂提取棉签上的残留，然后检测提取液中残留物的数量。回收量与材质试样上的加入量之比就是取样百分回收率。由于擦拭属于人工操作，通常每人需要重复三次回收率研究。每个残留物和表面类型的组合至少需要两个人进行 擦拭回收率研究。研究建立的回收率可以通过不同的方式定义，但通常定义为任意一个擦拭取样人员的最低平均回收率。一个可接受的拭子回收率取决于如何进行拭子回收率试验。如果在回收率研究确认取样方法时，没有对残留限度或分析结果进行修正，回收率通常要求70%或更高。如果回收率用于修正残留物限度或分析结果，回收率一般要达到50%或以上。

2. 淋洗法回收率
淋洗法回收率研究同擦拭回收率相似，将目标残留物溶液涂布在材质试样上自然晾干。对于擦拭取样的回收率，必须严格执行预定擦拭步骤。与之相反对于淋洗取样，无法在实验室中准确地重复淋洗步骤（除了提取取样的特殊情况）。然而在实验室中模拟淋洗程序是可行的。在可能的情况下，模拟淋洗的条件应该同实际的设备淋洗条件相同，包括淋洗溶剂以及淋洗溶剂温度的选择。其他情况下，应该选择与设备淋洗相同或最差的淋洗条件，例如回收率研究中溶剂量与被取样表面积之比应该同设备淋洗时相同或更低。

3. 目检回收率
这个过程实际上是确定一个定量的“目视检测限”，如果目检只是作为擦拭或冲洗取样的补充，则可以但不要求确定“目视检测限”。指定观察条件下的目视检测限可以通过在设备材质试样上涂布不同浓度（μg/cm2）的残留物来确定。并需要一组训练有素的观察者来确定表面残留物明显可见时的最低残留水平。目视检测限的意义在于，如果在清洁验证方案中，在同样（或更严格）的观察条件下确定设备表面已目检洁净，则可认为实际残留水平低于目视检测限。适当的观察条件包括距离，光照以及观察角度。目视检测限取决于残留物性质，表面性质（例如，不锈钢对PTFE）以及观察者的视力。文献报道的典型的目视检测限是 1-4μg/cm2。对于目视检测限，不需要确定回收率。该研究的目的是确定残留物明显可见时的一个残留物水平，这样目视洁净的任何表面上残留水平都低于目视检测限。

4. 生物负载及内毒素取样回收率
对于微生物取样，不适合进行回收率研究以确定表面回收率，原因之一是微生物检测的计数问题通常以“菌落形成单位”进行计数而不是单个微生物。第二个原因是在一个标准的取样回收率研究中，当材质试样晾干时微生物会死亡或失去生存能力。第三个原因是不清楚选用哪种微生物进行回收率研究。第四个原因是通常生物负载限度已明显低于可能影响产品质量或工艺性能（如在线灭菌）的水平，因此即使回收率低（<50%），不引入回收因子也不会影响产品质量和/或工艺性能。

       文章来源：允咨GMP制药技术

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