湿热灭菌设备的确认

湿热灭菌设备的确认范围和程度应当经过风险评估来确定，可采用系统影响性评估（SIA）及部件关键性评估（CCA）对设备进行全面评估。灭菌设备作为关键设备，需要执行的确认通常包括设计确认、安装确认、运行确认、性能确认。本节将以饱和蒸汽灭菌柜为例，对湿热灭菌设备确认的重点项目作简要阐述。

运行确认---联锁功能

对于双扉蒸汽灭菌柜，设备应具备以下安全联锁功能：
灭菌柜在正常工作条件下，当门未锁紧时，联锁功能禁止蒸汽进入灭菌室内；
连锁功能控制灭菌柜的门在室内压力完全释放前禁止打开；
在灭菌周期运行过程中联锁功能禁止打开灭菌柜两侧门；
除非维护的需要，联锁功能应禁止同时打开两个门；
在未显示灭菌周期结束之前，联锁功能禁止打开卸载门。
BD测试和真空泄漏测试程序结束后，联锁功能禁止打开卸载门。

运行确认---BD测试 Bowie and Dick test

BD测试用于评估灭菌柜空载条件下空气去除能力和蒸汽穿透能力的一种试验。BD测试通常是按测试包说明将测试包放置在灭菌腔内，进行简短的空载灭菌，查看测试包中的指示卡是否颜色变化均匀。导致BD测试失败有以下可能的原因：
空气去除不完全；
在去除空气的阶段出现了真空泄漏；
在供蒸汽过程中出现了非冷凝气体。

运行确认---真空泄露测试

真空泄露测试主要用于用于脉动真空灭菌柜，确认在真空状态下，漏入灭菌室的气体量不足以阻碍蒸汽渗透负载，并且不会导致在干燥期间负载受到污染，真空泄露测试步骤如下：
灭菌室为空载的条件下，开始运行真空泄露程序。
开启真空泵，当灭菌室压力为7kPa或者以下的时候，关闭所有与灭菌室相连的阀门，停止真空泵。观察并记录时间（t1）和压力（p1）。
至少等待300s，但不超过600s，让灭菌室中的冷凝水气化，观察并记录灭菌柜灭菌室内的压力（p2）和时间（t2）。
再经过（600±10）s之后，观察并记录一次压力（p3）和时间（t3）。
真空泄露率：V= (p3-p2)/(t3-t2)应不超过0.13 kPa/min。
注意：如果(p2-p1)的数值大于2kPa，可能是由于灭菌室开始时有过量的冷凝水。

运行确认---空载热分布测试
空载热分布测试是确认空载条件下灭菌室内的温度均匀性和灭菌介质的稳定性，测定灭菌腔内不同位置的温差状况，确定可能存在的冷点。空载热分布测试一般需要注意以下几点：
测试用探头在布点时不应与腔室内金属(如内壁、架子等)接触。
测试用探头在灭菌腔室内几何均匀分布。
至少有一支测试探头布于设备自身控制系统的温度传感器附近。
至少选择10个经过校正的温度探头，（探头的校准偏差应小于±0.5℃，当验证设备有特殊要求时，可依据相关要求进行校准），连续重复三次测试应符合要求。

性能确认---负载热分布测试及负载热穿透测试
在负载条件下对热分布及热穿透研究，测试一般需要注意以下几点：
应尽可能使用待灭菌产品，如果采用模拟物，应结合产品的热力学性质等进行适当的风险评估。
热分布探头的数量和安放的位置一般同空载热分布试验。
热分布探头不能接触带灭菌的装载物品；热穿透探头必须布于装载内部。
热穿透探头布点位置应有代表性，获得的数据可以确定最难灭菌的位置。
采用热穿透数据来计算物理杀灭时间FPHY。

性能确认---生物指示剂挑战测试
生物指示剂挑战测试主要目的是获取所要验证的灭菌程序杀灭微生物的实际数据，从而证明所建立的灭菌程序达到了程序设计中建立的生物杀灭时间(FBIO)。生物指示剂挑战测试一般需要注意以下几点：
所选用生物指示剂的数量应比装载物品的生物负荷高，耐热性应比生物负荷强。
评价FPHY和FBIO间的关系，生物指示剂应尽可能靠近温度探头的放置部位。
在放置温度探头和生物指示剂时，要避免人为地增加或减少某一区域空气的去除或蒸汽的穿透。
用于挑战测试的生物指示剂通常为嗜热脂肪芽孢杆菌的孢子，D值通常为1.5~3.0分钟，每片（或每瓶）活孢子数5×105~5×106个。生物指示剂用量的计算有两种方法：残存曲线法（按对数规则计算），阴性分数法(也称不生长分数法)。
残存曲线法
计算生物指示剂的用量可以采用以下公式：
F0＝DBi(lgNBi+1)
备注：DBi是生物指示剂的D值，NBi是生物指示剂的孢子含量。为了使生物指示剂验证得到阴性培养结果，灭菌F0应能使生物指示剂孢子含量下降至100后，再降低1个对数单位，即F0＝DBi(lgNBi-lgNF)=DBi(lgNBi+1)。
阴性分数法
计算生物指示剂的用量可以采用以下公式：
lgNBi=lgNt+F0/Dbi=2.303×lg(n/q)+F0/Dbii
备注：n为挑战试验瓶样品总数，q为挑战性试验结果为阴性的瓶数。当湿热灭菌工艺的灭菌温度和灭菌时间确定后，F0可以确定；生物指示剂确定后，Dbi可以确定；微生物挑战试验方案确定后，n、q可以确定。所以，通过以上的几个公式，可以计算出生物指示剂的用量，即N0。

       文章来源：允咨GMP制药技术培训

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