紫外可见分光光度计使用中常见问题解析

分光光度计是实验室里最常用的一种理化分析仪器，本文就分光光度计在使用过程中出现的几个常见问题，如仪器的预热、波长准确度的检查与校正、吸收池的使用方法、吸光度测定重复性等问题进行分析，并提出解决这些问题的适宜方法。

紫外可见分光光度计是分析测试实验室里常见的一种分析仪器，用于测定被测物质在一定波长照射下所产生的吸光 度的大小，从而实现对物质进行定性或定量分析。在平时的日常教学及到企业调研时，发现在分光光度计使用问题上，使用者多多少少都存在一些疑惑或使用不规范的问题，下面就常见的一些问题进行讨论。

1关于仪器的预热问题

在一般分光光度计的使用说明书上，要求仪器预热时间约20分钟；若是带微处理器的分光光度计，开机后仪器自动进入自检 (初始化 )状态，约需1O分钟左右。在分光光度计预热这个环节上，很多使用者或多或少存在问题，如开机只预热电路系统 (不调节波长、打开吸收池暗箱盖预热等)或认为初始化过程就是预热等等。

对带微处理器有自检功能的分光光度计，开机后仪器自检 (初始化)结束后，在测定窗口上，设置所需波长值， 用一个吸收池装上纯净水置于光路上，调 “0000A”后，预热 仪器，当仪器显示读数不再变化后即可进行测定。

对于紫外可见分光光度计，由于有双光源 (钨灯与氘灯)， 为了延长灯的使用寿命，开机自检完成后可以关掉测定时不用的光源灯。

2关于波长准确度的检查与校正

日常在使用分光光度计时，是否要经常进行仪器波长准确度的检查 ?答案是否定的。当在日常测定中发现仪器测定灵敏度下降，这时才应进行波长准确度的检查，最简易的检查方法 (粗检 )是：仪器开机后，调节波长为 580nm，在吸收池座的通光道中插入一张白色卡片纸，若能观察到一长方形 的黄色光斑，说明波长准确度属正常范围，否则就应进行波 长校正。

当仪器经过长途搬运、受过机械振动或更换光源灯泡后， 必须进行波长准确度的检查与校正。粗检同上，其校正方法 有：干涉滤光片或镨钕滤光片校正法、利用氘灯的特征发射线校正法。具体步骤可参考仪器使用说明书。

3关于吸收池的使用问题

按照吸收池使用的基本顺序分说如下：

(1)吸收池的润洗

吸收池装液前必须用待装溶液润洗 2～3遍，润洗前是否 要用纯水先润洗一遍呢?这可看具体情况区别对待。

如果初次用干的吸收池装待测液 (特别是有色溶液)时， 从维护保养吸收池的角度讲，为减小其干玻面对颜色的吸附能力，便于用后吸收池的清洗，建议先用纯水润洗一遍，再用待装溶液润洗 2～3遍；若后再用此吸收池装浓度相近或更高浓度的溶液 (如从小到大测定标准系列溶液的吸光度)时， 可直接用待装溶液润洗2～3遍即可。

标准曲线法定量时，如果是先测定标准系列溶液的吸光度，当测到样品溶液时，由于测定的样品溶液浓度比最后一 个标准溶液的浓度低或不可知时，建议先用纯水润洗一遍， 再用待装溶液润洗 2～3遍。

(2)吸收池的装液、擦拭与放置 吸收池润洗完成后注入待测溶液至池高的 2/3~3/4处。

(3)吸收池成套性检验及处理 新吸收池或吸收池使用一段时间后都必须进行成套性检验.

4关于吸光度测定重复性的问题

分光光度计在测定过程中，发现同一个溶液在不同时问里其测定结果不同，即重复性不好，其原因是什么?排除测定错误因素外，可 能原因有：

(1)仪器预热时间不够或预热方法不对所造成，应延长预热时间或采用正确的预热方法。

(2)光电转换器 (如光电管)因长时间使用其光电转换 效率发生了变化导致。这时标准溶液与待测溶液的吸光度都 同样变低，在相对定量时对结果影响很小。但是对这类仪器， 一 般建议连续使用时间不应超过 3h，若需长时间使用，最好间歇 30min 。

5其他问题

(1)发现测定过程中的一些不良操作不利于仪器的维护、保养，使用者应尽 可能避免。如在仪器的上方进行操作(如倒溶液)；拿出来的吸收池 (或吸收池架)放在仪器的面 板上；同实验室不同仪器的吸收池混用等。

(2)关于防尘、防潮问题

仪器一般都随机附有一只塑料布罩，不使用时用其罩住整个仪器，这是很好的防尘手段。但发现很多实验室里不用附来塑料布罩，而是 自己用一块普通布或做成布罩来覆盖仪 器，防尘效果不如塑料布罩理想。另外，在塑料布罩只放入数袋防潮硅胶，也能更好起到延长防潮的功效。在防潮时， 如果仪器设有防潮干燥筒的，应经常检查，发现变色立即更 换新的或加以烘干再用。

长期停用的分光光度计，要定期开机除潮，如每隔一个 月通电预热半小时，以保持整机呈干燥状态，并且维持电子元件的性能 。

       文章来源：GMP行业药文

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