学习生物药安全评价及检测技术

生物药物是指运用微生物学、生物学、医学、生物化学等的研究成果，从生物体、生物组织、细胞、体液等，综合利用微生物学、化学、生物化学、生物技术、药学等科学的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。看完小析姐下面的整理，你会对生物药有进一步的了解，记得分享噢。

生物技术药物的特点
1、结构确证不完全性
生物技术药物的活性主要取决于其氨基酸序列和空间结构，但由于其一般分子量较大，空间结构复杂，现有的分析方法和手段并不能完全地确认其化学结构。
2、种属特异性
生物技术药物的作用靶点主要是受体或抗原表位。由于不同种属的动物的同类受体在结构或功能上可能存在差异，因此一个生物技术药物可能在恒河猴体内具有生物活性，而在大鼠体内没有活性。另外，不同种属的动物对同一生物技术药物也可能表现出的不同反应。这是生物技术药物需要采用相关动物来进行安全性评价的主要原因。
3、多功能性
在同一生物体内，生物技术药物的受体可能广泛分布，从而产生广泛的药理活性和毒性作用，这也是生物技术药物临床前安全性评价关注的重点内容之一。
4、免疫原性
对试验动物而言，许多生物技术药物都是异源大分子，具有免疫原性，其诱 生的免疫反应可能会对安全性评价的结果产生影响。
生物技术药物非临床安全评价
根据《药品注册管理办法》，生物技术药物非临床安全性评价的基本内容与化学药物相同，包括安全性药理、单次给药毒性、重复给药毒性、遗传毒性、生殖毒性、致癌性、依赖性和特殊毒性（过敏性、局部刺激性、溶血性）试验。
但在进行生物技术药物的非临床安全性评价时，必须考虑到由于生物技术药物的特点，上述常规的非临床评价试验方法不一定完全适用于生物技术药物。生物技术药物非临床安全性评价中试验项目的选择、试验设计和结果评价等都应该结合具体药物的特点来进行，具体应考虑的因素包括具体药物的生物活性、结构特点、临床适应症、用药人群、临床用药方案等。“以科学为基础”和“具体问题具体分析”是生物技术药物非临床安全性评价的灵魂。
1、生物技术药物安全性担忧的性质和来源
生物技术药物的安全性问题可能主要来自以下三方面：
（1）药理作用的放大或延伸；
（2）免疫毒性，包括免疫原性、免疫抑制和刺激反应及过敏反应；
（3）杂质或污染物引起的毒性。对具体药物安全性担忧的性质和来源的分析有助于确定非临床安全性研究的试验项目和具体设计，以最大限度地为临床研究提供有价值的安全性信息。
2、受试物的质量
生物技术药物临床前安全性评价的主要对象本身。虽然表达蛋白宿主细胞（如细菌、酵母、昆虫、植物和哺乳动物细胞）的污染可能会导致潜在的危险，但这些由杂质或污染物引起的安全性问题应尽可能地通过纯化等质量控制手段来解决。一般来说，用于毒理试验的产品应与拟用于临床试验的产品具有可比性。当在药物的开发过程中为提高产品的质量或产量进行工艺改进时，应考虑到生产工艺改变对动物试验结果外推至人体可能产生影响。
3、相关动物的选择
非临床安全性评价的意义很大程度上取决于动物毒性反应和人体不良反应之间的相关性，因此选择一种与人体相关的动物对于非临床安全性评价至关重要。由于大分子蛋白质很难发生变形扭曲，生物技术药物大多仅作用于特定的受体产生药效或毒性作用，很难与其它受体发生作用。化学药物以代谢过程的差异来判断相关动物，通常使用大鼠和犬进行安全性评价，但对生物技术药物而言，除非其在大鼠或犬体内具有生物活性，否则使用这两种动物进行非临床安全性评价是不合适的。
那么该如何选择生物技术药物的相关动物呢？国外在非临床评价之前，一般通过体外试验来筛选生物技术药物的相关动物。传统的竞争结合试验或BIAcore结合试验常用来考察受试物与人体靶组织和不同试验动物靶组织的结合情况。当某种动物的靶组织结合试验结果呈阳性时，还可以针对不同受试物的特点，进行体外的细胞功能试验，考察动物和人体生物功能的一致性。这些研究工作通常需要对生物技术药物在人体和试验动物的作用靶点进行克隆、表达和纯化。
通常认为动物蛋白质和人体蛋白质氨基酸序列的同源性越高，人体蛋白质越容易与动物受体发生交叉反应，因此人源性重组蛋白与动物同类蛋白氨基酸序列的一致性往往被当作筛选相关动物的一种手段。然而，事实却往往与设想不一致。IL-2和IL-6在动物和人体内的同源性很差，但重组人IL-2和IL-6却在很多种试验动物中显示出药理活性。事实告诉我们，蛋白质的同源性是筛选相关动物的起点，但不能作为确定相关动物的手段。
传统的化学药物需要使用两种试验动物（啮齿类和非啮齿类）来进行安全性评价，但对生物技术药物而言，如果能够找到相关动物且对其生物学活性已充分了解，一种动物已足够。不相关动物的毒性试验结果会对预测人体可能的毒性反应产生误导。如果确实无法找到相关动物时, 表达人源受体的转基因动物或使用同系蛋白进行安全性等研究也是一种选择。
4、给药剂量的选择
确定试验动物给药剂量的主要依据是临床给药剂量，同时也需考虑容量、浓度、制剂和给药部位的影响。如果活性成分清除较快或溶解度低，可适当增加实验动物的给药次数或给药容量。

动物给药剂量应包括中毒剂量和未观察到不良反应的剂量(NOAEL)，以反映剂量反应关系。对某些毒性很小或无毒的生物技术药物，需根据药物预期的药理/生理作用、受试物的易得程度以及临床适应症选择合理的给药剂量。由于安全范围与每一类药物及其临床适应症的特点密切相关，因此在这种情况下，硬性地规定具体给药剂量或安全范围往往是不合适的。某些药物对动物细胞的亲和力和作用强度明显低于人细胞，此时选择较高的给药剂量进行动物试验是很重要的。
5、免疫原性
一般化学药品在动物体内很少具有免疫原性。生物技术药物由于分子量较高，往往在动物体内具有免疫原性。在重复给药毒性试验期间应注意检测抗体滴度、出现抗体的动物数、中和抗体等。人体也可能产生抗人源蛋白的血清抗体，但往往在抗体出现后仍存在治疗作用。在很多情况下，如果生物技术药物的免疫原性不干扰对安全评价数据的解释，可认为抗体的产生并无特殊意义。除非大部分动物的抗体中和或削弱了生物技术药物的毒性作用，否则抗体（即使是中和抗体）的检出不宜单独作为提前终止临床前安全性评价或改变试验设定的观察时间的标准。由于免疫原性的存在，在生物技术药物非临床安全性评价中应考虑到抗体形成对不良反应的范围和程度的影响，补体活化等引起的毒性的干扰，以及与免疫复合物形成和沉积有关的病理变化。
6、遗传毒性和致癌性
由于生物技术药物很难与DNA或其他染色体物质发生直接作用，因此通常不需要进行的常规遗传毒性试验。自发突变细胞的累积(如通过促进增殖的选择优势)可能致癌，但常
规的遗传毒性试验并不能检测这类情况。针对这些问题, 可以采用其它体内或体外试验方法进行研究和评价。标准致癌试验一般对生物技术药物并不合适。若从其生物活性角度考虑存在潜在致癌性担忧时，应结合其有效性、适应症性质等进行利弊权衡。
7．药代动力学
在相关动物中进行的生物技术药物的药代动力学和组织分布试验对于辅助说明药物安全性具有重要的价值，但由于蛋白质在生物体内会很快降解为小肽和氨基酸，因此其药代动力学研究具有相当的难度。在进行方法学研究时，应根据具体药物的特点选择至少一种经过确证的测定方法。放射性标记是生物技术药物药代动力学研究中经常使用的方法。使用这种方法时，重要的是要显示放射标记的受试物质仍保持了与非标记物质相当的生物学活性。由于放射性标记联接不稳定，或标记的氨基酸进入与药物无关的蛋白质循环，使用放射性标记蛋白得到的组织放射活度和/或放射自显影数据有时会很难解释。由免疫介导的清除机制也可能影响生物技术药物在动物体内的药代动力学行为。由于对此类药物的代谢途径已有相当的了解，因此一般不需要进行经典的生物转化试验。
生物技术药物分析检测

生物技术药物分析是一门集研究、检测和控制于一体的综合性学科，主要是分析鉴定各类生物技术药物的化学组分、构型、形貌特征，检测药物质量、不同药物中各组分含量、药代降解产物的含量。生物技术药物，特别是蛋白质药物，由于自身稳定性较低，极易发生部分肽链断裂或折叠，而导致蛋白质团聚失效，在原料药生产，生物制剂储存、运输至临床应用的各个环节均应进行产品质量分析检测，全面监控生物技术药物质量品质，保障病患治疗用药的安全、合理和有效。
生物技术药物分析检测主要工作包括药物分析与检验、杂质与安全检验、氨基酸类药物的分析与检验、多肽及蛋白质类药物的分析与检验、酶类药物的分析与检验、脂类药物的分析与检验、核酸类药物的分析与检验、糖类药物的分析与检验、基因工程药物的质量控制。
分析检测方法主要有化学法、仪器分析法及生物检定法。分析检测常规步骤如下：审查→取样→鉴别→检查→含量检测→记录→出具检测报告。
（1）化学法
化学法分析检测生物技术药物组分含量，主要包括重量法和滴定法。重量法是通过精准称取定量待测物，根据相关单质和化合物的质量，计算待测物中目标物质的含量的定量法。滴定法是化学实验室使用的常规方法，测定数据准确但操作繁琐，氨基酸类药物多用滴定法对其含量测定。
（2）仪器分析法
仪器分析的灵敏度较高，用于微量和痕量分析检测，包括光学法、电化学法、色谱法、电泳法、酶法分析法和免疫分析法等。随着现代精密分析仪器不断研究问世，生物技术药物的分析检测手段也愈发精准完备。
a.凝胶电泳法十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）
凝胶电泳法十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）是在蛋白质类生物技术药物常用的分离和检测方法，其迁移速率取决于分子量大小。SDS-PAGE适用于分离和检测分子量为5～500kDa的寡聚蛋白质，该类蛋白质共价键在聚丙烯酰胺环境下较为稳定，通过调节梯度凝胶或特定缓冲体系可以进扩大分子量的检测范围，SDS-PAGE的局限性在于检测范围较窄，由于加热过程可能会导致蛋白质类药物在K12中非正常降解，其定量的准确性欠佳。
b.超速离心法超速离心法（AUC）
超速离心法超速离心法是根据不同生物药物沉降特质（分子形貌、构型、分子量大小有关），通过超速离心机对待测样进行离心分离，检测系统动态监控药物分子的沉降情况，分析检测待测样品的理化性质。沉降平衡法与沉降速率法属于超速离心法范畴。通过沉降平衡法可得到生物药物分子的相关化学计量信息；沉降速率法可得到分子的分子体积和构型等流体力学性质，是寡聚蛋白质检测常用分析方式。
c.光学浊度法
研究表明，散射光的散射角和强度与悬浊液中物质粒径、形貌等参数相关。将生物技术药物配制成悬浮液，测定透过溶液的光的散射程度分析检测药物相关理化参数。浊度法是利用溶液中颗粒悬浮物的Rayleigh散射特性测定溶液浑浊度的方法。生物技术药物的蛋白质类制剂，可通过浊度法快速测定蛋白质的浓度、悬浮粒径的大小，广泛应用于蛋白质液体制剂聚合程度的分析检测。
d.色谱法色谱法
色谱法色谱法的优势在于灵敏度高、可精准定量并能够同时检测混合组分中待测物含量，其在分析检测研究中的地位难以取代。高效液相色谱法（HPLC）采用了高效固定相、高压输送流动相和在线检测技术，对生物技术药物进行有效成分分析、鉴定、检测且不影响其分子构型和生化活性。我国在新药临床实验前的审批流程中明文规定：新药的药物代谢动力学实验应首选HPLC检测。
（3）生物检定法
免疫分析法生物技术药物具有免疫原性，这为免疫分析法应用提供相应平台。酶联免疫吸附法（ELISA）精准灵敏、稳定性好、设备自动化程度高、可批量检测、无放射危害是生物技术药物免疫分析中常用的分析方法。
免疫分析法和生物分析法都会受到活性代谢产物、生物基质、血清中抑制因子等因素干扰或特质性限制，无法全面分析检测生物技术药物在生物体内降解过程的完整信息。
随着科学不断进步，生物医药行业也进入蓬勃发展时期，通过临床试验投入市场的生物技术药物数量、种类将会不断提高，现代生物分析检测技术也应随之更新完善，满足市场所需。因此，在生物技术药物的生产、储存、运输及临床治疗等过程中，应用先进精准的方法，加强对原料药和成品制剂的分析检验，环节当中控制和研究该产品的质量，以全面控制生物药物的质量，保障病患治疗用药的安全性、合理性及有效性。目前，生物分析检测技术逐步发展成熟，已被正式运用到不同的生物学检测领域当中。在新科技的推动下，生物制药分析和检测技术将迎来新的发展机遇。

       文章来源：分析测试百科网

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