细胞结团的原因和预防措施

悬浮细胞可能由于各种原因相互附着并发生结团。细胞结团最常见的原因是在细胞裂解之后，培养基中存在游离DNA和细胞碎片，DNA的粘性使细胞和其他碎片聚集成大的团块。以下是细胞裂解和DNA被释放到培养基中的一些原因。

消化过度
过度使用蛋白水解酶（如常用于细胞分离的胰蛋白酶）可能会导致细胞结团。

环境应力
机械力、反复冻融循环和其他环境应力可加速细胞死亡，其早期现象可能是细胞和细胞粘附。

组织分解
通过化学、机械或酶法从初生组织制备单细胞悬浮液可能会导致一些细胞破裂。从组织制备单细胞悬浮液时，通常需要胶原酶消化细胞外基质。

过度生长
当细胞达到融合状态时，细胞碎片和细胞裂解产生的游离DNA就会堆积过多。

预防措施
细胞结团会减少细胞对关键营养素的获取，从而阻碍整体细胞的生长。细胞结团还会影响需要清洁制备单个细胞的下游检测。根据结团的根本原因，下面列出预防细胞结团的建议解决方案。

细胞裂解与DNA释放
DNaseⅠ可用于组织降解以及常规细胞培养过程中，以防止多种类型细胞的结团。
注意：DNaseⅠ在二价离子（如Mg2+，Ca2+）存在时活性最大。

二价阳离子
柠檬酸盐和EDTA等螯合剂可以用于去除细胞培养基中的钙离子。也可使用无血清、无Ca2+ /Mg2+平衡盐溶液。

细胞密度
传代前，参考细胞系文献或者已知的特性来获取推荐的细胞密度。

操作
在进行细胞分离时，应小心处理细胞并使用适当的离心机设置。微小的结团可以通过搅碎，或者轻柔地上下吹打细胞来解决。

支原体污染
处理掉被污染的细胞，消毒培养室和细胞培养箱。遵循良好的实验室规范以避免污染。

       文章来源：CROU制药在线

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