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Q1：摇瓶传代时，P2用的A品牌摇瓶，P3用的是B品牌摇瓶，有什么影响，或者法律法规对这方面有什么说明指导？
A1：首先是必须按照申报的工艺进行生产，不复苏细胞是重大变更，如果想这么做，得做工艺验证，产品稳定性试验，再申报变更，国家局批准后生产。这个周期很长，一般不会由厂家这么做。再者不复苏细胞的话，不能保证每次培养细胞的生长特性一致，造成收率不一致，很影响产品质量和效益。
统一复苏一批，一起冻了，要用的时候拿一只出来扩增，扩增的步骤也一样，保证原料起始一致，该冻起来的种子也是经过中检所验证的，那么当然是比较好，不然的话，每天上罐的时候代次是不一样的，也就不是同一株细胞，无法保证上罐之后细胞质量一致~
Q2：单克隆抗体的原液解冻是在哪里以什么样的方式进行操作的？
A2：（在制剂生产前）一般原液都是冷冻低温保存的，解冻之后才能将若干袋原液进行混合过滤。可以在前期研发时做冻融实验。看情况，不是很着急的就放到2-8度冰箱里缓慢解冻，比较着急用就常温水冲弄过几种自身很容易降解的蛋白，但是也没因为解冻而降解的。目前使用的是25摄氏度饮用水解冻，据说容易降解，现打算采用摇床解冻。最好是用冻融机，可以快速溶解原液，保证蛋白活性不受损失。
Q3：公司生产注射用重组蛋白类生物药（CHO细胞）一般其原液的生产过程都是从细胞复苏--细胞培养、扩增--分离纯化---原液检定，整个周期一般需要40天左右，是否可以在保证传代次数不超过规定的前提下，将培养扩增后的细胞作为下一批原液的种子细胞，缩短生产周期呢？
A3：首先是必须按照申报的工艺进行生产，不复苏细胞是重大变更，如果想这么做，得做工艺验证，产品稳定性试验，再申报变更，国家局批准后生产。这个周期很长，一般不会由厂家这么做。再者不复苏细胞的话，不能保证每次培养细胞的生长特性一致，造成收率不一致，很影响产品质量和效益。统一复苏一批，一起冻了，要用的时候拿一只出来扩增，扩增的步骤也一样，保证原料起始一致，该冻起来的种子也是经过中检所验证的，那么当然是比较好，不然的话，每天上罐的时候代次是不一样的，也就不是同一株细胞，无法保证上罐之后细胞质量一致~
Q4：菌种长期储存会使活力下降，但对于长期储存的菌种，尤其是基因工程菌来说，活化后还可恢复原来的活力吗？
A4：氮保存两年内，超低温保存一年内，如果冻存步骤恰当，复苏之后活力应该在95%以上。
Q5：不同产品的纯化应当分别使用专用的层析分离柱。不同批次之间，应当对层析分离柱进行清洁或灭菌。不得将同一层析分离柱用于生产的不同阶段。应当明确规定层析分离柱的合格标准、清洁或灭菌方法及使用寿命。层析分离柱的保存和再生应当经过验证。这个分离柱的寿命，如何确定？
A5：要是指填料。阴阳离子、亲和，填料是有一定寿命的，吸附能力会逐步下降，就当清洁验证那么做就可以了。最主要的标准就是洗脱效果、回收率什么的，自己定个标准，规定警戒线换填料。这个验证一般填料供应商会做的。 柱效就是柱子的效果，可以测试一下吸附能力 很简单，用一定浓度的标准溶液过一遍柱子，看看填料吸附量多少，是否符合标准，能否起到过滤的作用。 另外用缓冲液冲洗柱子，检测流出。柱效是柱子的效果，可以测试一下吸附能力很简单，用一定浓度的标准溶液过一遍柱子，看看填料吸附量多少，是否符合标准，能否起到过滤的作用。另外用缓冲液冲洗柱子，检测流出液，看看有多少残留，填料是否还干净等等有的公司定有效期的时候，是根据载量总数定的，有的是根据使用次数定的，根据具体情况设计验证方案。
Q6：生产用种子批、细胞库应当在规定的贮存条件下在不同地点分别保存，避免丢失。
A6：除避免丢失外，更主要是防止意外导致的种子活性降低、死亡等，所以，原始种子库、主种子分开存放，单纯低温冰柜是不够的，原始种子库还应于液氮中备份保存。工作种子库可直接放车间，不备份可以，备份更好。管理上，双人双锁是最基本的，还应有监控、记录、报警等措施，包括冰柜温度异常等。液氮中保存还应有液氮量的监控。
Q7：同一超滤器能否用于同一产品的不同阶段
A7：第一选择：有条件的话最好分开用；第二选择：退而求其次设备共用，但是滤芯或膜包分开专用。不认同全套共用。滤膜、填料的结构及生物制品成分的复杂性决定了清洁验证的效果很难保持长期一致性，你可能持续十几个同样的清洁程序都没有杂质检出，但是一用到工艺上随着条件的改变、甚至受到你的产品本身的影响，原来吸附的杂质就下来了。清洁验证所检的项目都是已知的，但是生产过程中引入的未知的微量的有生物活性的成分说不清，不可能都考虑到。想想GMP为什么用平整、光滑、易清洁等规定。
有些问题是实践出来的。柱层析本身即使你做了清洁验证。实际情况也是放置一段时间后还在释放吸附物。超滤本身是分子截留。情况会好一些。相对风险低。所以，一楼建议你不要使用同一个膜包。从认证角度说，你重复用在不同工序，会被现场质疑的。从科学性角度说，我觉得可以考虑在低风险工序，或者说不要用于最后一个超滤工艺步骤。
Q8：发酵时使用的原材料（用于配制培养基，例如一些无机盐等），进厂全检后是否需要留样；分离纯化用到的有机溶剂，进厂全检后是否需要留样
A8：无论是发酵的原材料还是分离纯化的原材料，你都可以进行是否是关键物料的评估，评估为关键物料的，肯定需要进厂的每批进行全检，非关键物料的可以定期全检，每批检测重点项目（如鉴别，含量等），至于留样，在关键物料评估后如是关键物料，可根据物料是否易保存的性质进行评估选择性留样，非关键物料可以不用留样吧。GMP规定物料的留样主要是针对制剂的原辅材。
Q9：进口原辅料应当符合国家相关的进口管理规定。具体的要求有哪些呢？
A9：1.境内外上市制剂中未使用过的药包材、药用辅料，应进行关联申报或由药品注册申请人按照2016年第155 号通告要求一并提交全部研究资料；如果已经使用的，在报产的时候关联。
2、现行版《中国药典》已收载的，应符合现行版《中国药典》要求；现行版《中国药典》未收载的，应符合国家食品标准或现行版USP/NF、EP、BP、JP 药典标准要求；其他辅料，应符合药用要求。
3、辅料的合法来源证明文件，包括辅料的批准证明文件（含有效的药用辅料注册证、核准编号或实行关联审批的药用辅料《受理通知书》等）、标准、检验报告、辅料生产企业的营业执照、《药品生产许可证》、销售发票、供货协议等的复印件。
Q10：细胞培养和细胞纯化阶段的设备应该检测哪些项目，限度又该怎么定？
A10：可降解蛋白质产品，可以通过清洁的最终淋洗水和罐、管内壁的TOC含量表示蛋白质清除程度。细胞和纯化的不锈钢容器清洁，因为是原液制备，不同于制剂配制罐，可以通过面积和最低反应日计量来计算具体的含量，所以一般规定淋洗水1～2ppm，表面1～2ppm/25cm2即可，如果最终淋洗水是注射用水，其pH，电导率，内毒素、微生物接近注射用水水质可以被认为清洁良好。
Q11：单抗中吐温80的作用是什么？
A11：表面活性剂，稳定蛋白的作用，不稳定的蛋白表面张力很容易让蛋白聚集，TW80可隔绝气液界面，改变张力，从而保护蛋白。
制剂部分，主要是增溶！
吐温80在单抗制剂中是起稳定剂作用，防止蛋白质溶液出现团聚、沉淀。
Q12：细胞培养用的培养基是否要作为关键物料？
A12：培养基的好坏会直接影响细胞的生长，进而影响生产工艺的稳定，肯定算是关键物料。
辅料是可以最终制剂中存在的，原材料是可以过程去除的。
Q13：生物制品对不锈钢材质的要求
A13：高氯浓度等都可能腐蚀不锈钢，哪怕是316L；所以应考虑降低接触时间或选取其它材质（不锈钢镀膜等）；对于接触高氯体系等情况，不锈钢也比较难在验证/确认时评估通过。
看你是配液还是储液，配液接触时间短，一般盐溶液浓度不是很高的话，316L能够承受，好一点用904L。储液的话接触时间较长，用254或者2507。最好的就是钛材了，但是这玩意造假特贵，或者选用镀钛可能便宜一些。
文章来源：允咨生物GMP学苑
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