关于无菌工艺验证这几点你做到了吗？

为什么我们如此重视无菌工艺模拟验证？无菌工艺模拟是我们从事无菌生产所必须要做的也是经常要做的一件事，这里谈的无菌工艺模拟验证也就是经常说的培养基模拟灌装验证，是指在无菌生产工艺验证中，以培养基替代实际生产介质，模拟实际产品灌装过程，以检验无菌生产线能否达到无菌保证水平。对于一个新建成的无菌生产线只有连续三次成功地通过培养基灌装后，才能投入生产使用。

中国GMP附录《无菌附录》第四十七条对模拟灌装所做的要求如下：
1、无菌生产工艺的验证应包括培养基模拟灌装试验。
2、应根据产品的剂型以及培养基的选择性、澄清度、浓度和灭菌的适用性选择培养基。
3、应尽可能模拟常规的无菌生产工艺，包括所有对产品的无菌特性有影响的关键操作，及生产中可能出现的各种干预和最差条件。
4、培养基模拟灌装试验的首次验证，每班次应连续进行3次合格的试验。
5、空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应重复进行培养基模拟灌装试验。
6、培养基模拟灌装试验通常应按生产工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。以及发生污染的结果判定方法。
7、培养基模拟灌装容器的数量规定。
FDA CMP 无菌工艺药品指南是这样说的：应当使用微生物培养基替代产品来验证无菌操作，这种工艺模拟，也称为培养基模拟分装。

EU GMP附件1 无菌药品生产中对于无菌工艺模拟是这样说的，无菌工艺验证应包括一个使用营养培养基的工艺模拟试验。

无菌工艺模拟是工艺验证的方式之一，确保产品全程无菌保证水平也是该工艺最大的特点，对于无菌生产工艺来说，培养基模拟灌装验证仅能证明无菌工艺系统（人机料法测环）的无菌保证能力在某一个时间点或者培养基模拟灌装验证这一个时间段的表现，并不能保证在不同时间段会自始至终保持良好的无菌保证水平。换句话说，培养基模拟灌装验证，仅能证明本次验证阶段的无菌保证水平，间接反映了现阶段无菌工艺系统的无菌保证能力。

所以说无菌工艺验证（培养基模拟灌装验证）是对整个无菌生产工艺过程中的无菌保证水平的验证。

 对于无菌生产工艺，我们要尽可能有做到相对无菌，绝对的无菌理论上来说是不可能实现的，也是无法证明的，即使人们将整批模拟产品进行了微生物全检，也仅能证明我们本次的生产活动是无菌的。即使所有与无菌产品的与无菌控制有关的所有条件（人、机、料、法、环）人员、厂房设备、器具容器、原辅材料、生产环境都经过了有效的处理和确认（验证），但是当把这些所有要素（人机料法环）按照一定的工艺规程排列组合在一起的时候，仍有可能会出现无菌条件得不到保证甚至产品被污染的可能。

首先，应尽可能模拟常规的无菌生产工艺，也就是尽可能按照常规的生产工艺进行培养基模拟灌装验证。模拟的物料包括内外包材应与正常的工艺一致，如工艺是用的西林瓶我们就使用西林瓶模拟灌装，工艺采用的是安瓿瓶工艺模拟也应使用安瓿瓶，其它包材如胶塞、铝盖等。人员为固定的操作人员，可以是最多的允许人数，设备设施、公共系统像空气净化系统和水系统都是经过确认与验证的。

其次，应选择合适的培养基，应能适应广谱微生物和生长，包括细菌和真菌，同明培养基应具有一定的澄明度和较小的粘度，尽量与生产物料的性质相接近，常用的有TSA胰酪大豆胨琼脂培养基，SDA沙氏葡萄糖琼脂培养基、FLM硫乙醇酸盐流体培养基等。

再有，应包括所有对产品的无菌特性有影响的关键操作，及生产中可能出现的各种干预和最差条件。关注模拟灌装实验的代表性，灌装时间代表性和批量的代表性，操作和人员的代表性还有剂型与包装容器代表性，最大规格和最小规格都应涵盖。

上述条件都达到了，我们就要进行无菌生产过程和模拟了，工艺模拟的核心就是我们要尽量模拟最差的工艺状况，如果在最差的条件下，我们的工艺模拟能够成功，那么其他情况就理论上也能够符合要求，这其实和清洁验证的道理是一样的，我们要用共线产品组内我们要选最难清洁的产品来进行清洁验证，清洁条件选择最长的连续生产时间后的清洁、最长的生产后放置时间的清洁、最长的清洁后的相许时间考察。总之一切可能的最差条件都应涉及到。
那么什么是“常规的无菌生产工艺”中的“最差条件”？分为以下几个方面：

人员，经过良好的培训和资质确认的高素质的人员，经过了无菌操作的培训，熟知无菌工艺流程和各项操作规程，能耐受无菌生产工艺的生产过程时间、生产环境条件，尤其是夜班、倒班、加班、拖班……等生产过程容易出现的。并增加灌装人员的数量超过正常灌装生产所需的人员数量，包括人员操作最有可能出现的误操作的干扰模拟状况。

生产设备，设备、器具、组件……清洁、消毒、灭菌后在无菌工艺区域保存时间（最好是使用时间）超出控制要求或者接近控制要求的时限，就是设备的最长放置时限。模拟设备故障、设备维修、部件调整、拆卸、替换。模拟设备工艺参数的较苛刻运行条件，低速、高速、包装容器的极限规格。物料在设备是的装载是否最大等。

物料，使用促生长培养基，无菌物料、药液实际灌装前在储罐中保存放置的最长时间，无菌物料需要除菌的时间间隔，无菌过滤到灌封加塞完成所需要的最大可能时间，灌装后的储存时间。

方法，严格执行所有的工艺规程、检验方法、操作规程，并且选取SOP范围内的苛刻条件，证明“模拟常规的无菌生产工艺”中的最差条件的无菌保证水平。
 检测，检验检测条件无须赘述，主要是环境监测结果、无菌检验、微生物鉴别结果……
 
环，无菌环境的清洁、消毒、灭菌后的最长放置时间，最好是动态生产的最长使用时间，环境保护设施设备的故障、异常操作对环境的影响，比如开关门等。初效、中效、高效的衰减对于送风量影响的最差条件。最大人员数量对于环境的影响。

综上所述，我们对于新项目建成后、重大偏差变更后、重大维修后、长时间停产后的培养基模拟灌装验证或再验证，与正常连续生产的每半年周期的再验证应分开描述。每次模拟都具的一定的针对性，所做的内容也会有一定的侧重。

       文章来源：允咨GMP制药技术

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