理化分析方法的专属性和精密度验证

专属性

  专属性定义为“当预料到一些组分可能存在时，准确无误地检测被分析物的能力。通常这些可能存在的组分有杂质、降解产物、基质等。”其他著名组织如IUPAC和AOAC等使用“选择性”表明相同的含义。

专属性的研究一般优先于其它验证项目，为方法首要的属性，鉴别反应、杂质检查、含量测定方法应考察其专属性。一种方法不够专属，可由其他分析方法予以补充。

• a) 鉴别

鉴别试验应证明被分析物符合其特征，专属性试验要求证明能与可能共存的物质或结构相似化合物区分，通常通过含被分析物的样品呈正反应，而不含被测成分的样品呈负反应，结构相似或组分中的有关化合物也应呈负反应的途径来证明。

• b) 杂质检查

在可获得杂质情况下，可向供试品中加入一定量的杂质，证明杂质与共存物质能得到分离和检出。在不能获得杂质或降解产物情况下，专属性可通过与另一种已证明合理但分离或检测原理不同、或具较强分辨能力的方法进行结果比较来确定。或将供试品用强光照射、高温、高湿、酸、碱水解及氧化的方法进行破坏，比较破坏前后检出的杂质个数和量。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测。

• c)含量测定

在可获得杂质情况下，对于主成分含量测定可在供试品中加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质和辅料的试样比较测定结果。

在不能获得杂质情况下，可采用另一个经验证方法或药典收载的方法进行比较，对比两种方法测定的结果。也可采用破坏性试验（强光照射、高温、高湿、酸、碱水解及氧化），得到含有杂质或降解产物的试样，用两种方法进行含量测定比较测定结果。必要时进行色谱峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。

精密度

精密度系指在规定的条件下，同一份均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。

精密度可以在以下三个层面考虑：重复性、中间精密度和重现性。在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性；在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度，称为中间精密度；在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度，称为重现性。

• a).重复性

在进行重复性验证时，要求待测组分浓度在100%时重复测量至少6次或覆盖整个规定浓度范围并重复测量至少9次。例如，可以在三个不同浓度分别进样三次。

• b).中间精密度

中间精密度通过比较同一实验室数日内各次检测的结果计算而得。方法的中间精密度可以反映以下因素引起的结果差异：

• 不同的操作人员

• 不一致的操作时间

• 不同的仪器

• 不同供应商的标准品和试剂

• 不同批次的色谱柱

• 综合因素

中间精密度验证的目的是证实方法在同一个实验室内运行能够得到相同的结果。中间精密度测定的因素应该能够代表方法在实际测试过程中可能遇到的变化因素从而正确评价其影响程度。

• c).重现性

重现性的目的是证实分析方法在不同实验室运行能够得到相同的结果。分析方法的重现性通过不同实验室的不同分析人员对均匀样品分析的结果计算而得。重现性的验证对于在不同实验室使用的方法非常重要。

• d).精密度数据要求

均应报告偏差、标准偏差、相对标准偏差或置信区间。精密度可接受范围参考下表。在基质复杂、含量低于0.01%及多成分等分析中，精密度接受范围可适当放宽。

在进行精密度验证时应考虑区分方法精密度和仪器精密度的区分。如果同一均匀标准样品溶液连续重复测定六次，记录每次测定各组分响应并计算各响应值之间的相对标准偏差，测试的仪器的精密度。

正确的方法精密度（重复性）应采用同一批号均匀样品，按照分析方法规定的制备过程和测试过程分别称量出六份样品并,测定每一份样品，并计算每一次测定结果之间的相对标准偏差。

       文章来源：允咨GMP制药技术

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