【干货分享】重组蛋白制备工艺过程中内素素去除策略

内毒素是复杂的混合物，在整个工艺中从源头就要将内毒素去除设计进去。每一步工艺过程去除一点，更要在无菌操作环境，无热源器皿中操作。
     
      1.内毒素的去除是系统工程，每一步都要考虑。
      2.保证工艺过程的环境器皿的洁净无热源，避免交叉污染。
      3.内毒素是复杂的混合物，不同来源的内毒素性质差异较大，同一来源的，不同分子之间性质差异也较大，所以内毒素去除没有通用的方法。
      4.内毒素的去除通常和各种方法配合使用，如离子交换层析加纳滤，疏水层析加凝胶过滤层析等。

      如重组大肠杆菌表达的胞内可溶性Lysozyme中内毒素的去除：

     1）在收集细胞之后，重悬用的水，器皿都要无热源，破碎后，先硫酸氨盐析，盐析的样品用疏水层析介质Phenyl Focurose 6FF(HS)进行纯化，此时内毒素在高盐环境中聚集，过疏水层析时流穿，此过程可将内毒素从100万EU/ml降低到1万EU/ml；

2）经过疏水层析纯化的样品，内毒素含量仍然很高，在洁净环境中，在过离子交换层析SP Focurose 6XL，选择合适的层析条件，让蛋白结合，内毒素流穿。此过程可将内毒素从1万EU/ml降低到100EU/ml。

3）经过离子交换层析的样品，在用凝胶过滤层析，用Focudex G-75层析介质,缓冲液中加入200mM的NaCl，避免蛋白和内毒素结合，也可以加入2%的Triton X-114.此过程可将内毒素从100EU/ml降低到0.1EU/ml.

       文章来源：允咨生物GMP学苑

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