HPLC方法开发、常见故障、维护与应用专题公开课学习宝典(2)

2、脱气机

原理：溶剂瓶中的溶剂在 LC 泵的抽取下流过真空箱内的特殊管状塑料膜。当溶剂经过真空管时，溶剂中溶解的气体将渗过塑料膜进入真空箱。当溶剂离开真空脱气机的出口时，几乎已被完全脱气。

网友问题精选

1、色谱柱干了还能用吗？
答：色谱柱干了可以通过再生继续使用的，利用全有机相，例如，甲醇、乙腈等溶液，低流速排除柱子内的气泡，在这里不建议使用纯水冲洗，纯水的排气效果远远比不上有机相的效果。

2、四元泵和二元泵有什么区别呢？

答：四元泵有一组泵和一个比例阀，通过控制比例阀控可以制四个通道，调节四个通道的溶液比例。二元泵有两组泵，每组泵控制一个通道，因此只能控住两个通道。

3、玻璃过滤头25％硝酸浸泡，是否需要过夜？
答：当使用35%的硝酸浸泡时，只要1个小时就可以达到目的效果，当使用20%的硝酸时，过夜的效果会更好一些。

4、正相柱塞杆可以用于反相色谱吗？

4、答：当使用反相色谱要切到正相时，正相为叔丁基甲醚、四氢呋喃等极性比较小的流动相时会对反相色谱的柱塞密封圈产生腐蚀作用，如果经常使用诸如此类流动相时，还是要把反相色谱的密封垫进行更换。

5、安捷伦1260-II的仪器经常出现自动进样器针座压力高，是怎么回事？
答：如果流动相是过滤使用的，进样器针座经常压力高，意味着样品里有未溶解的杂质，可以通过重新选取滤膜进行解决。冷藏或者静置也会起到一定的沉淀作用。


6、峰形不好的原因有哪些？
答：液相峰形不好的原因有很多，首先，最好选用流动相溶解样品，避免溶剂效应；其次，有可能是流动相的PH值不当，建议使用缓冲盐；此外，进样量、色谱柱老化也会影响峰形。

7、老师，色谱柱堵了，一般如何解决
答：色谱柱堵塞绝大部分会发生在柱头，有条件的情况下，可以将柱头筛板拆卸下来，进行超声清洗，或者将色谱柱进行短时间反接冲洗。

8、如果检测物质的标样是用甲醇定容，而样品是用水前处理，标样与样品上机检测，是不是峰型与保留时间会有差距？
答：有可能会产生溶剂效应，溶剂效应最明显的特征就是峰前延，所以对峰形会有影响，对保留时间影响不大，如果检测物质的响应足够高，可以通过减少进样量，降低溶剂效应，进而改善峰形。

9、分析柱和保护柱的区别，保护柱怎么用？
答：保护柱的主要作用是将流动相中的颗粒杂质留在保护柱内，对于高酸、高碱的流动相，有填料的保护柱也可以保护色谱柱填料。相比于分析柱，价格会便宜很多。

10、流动相如果跑空了，会有什么后果呢？怎么解决呢？
答：在整个色谱系统中都会气泡进入，解决办法就是排气泡，进行系统冲洗。

11、饲料产品中不进行前处理提取，直接用甲醇定容，可以吗？
答：饲料基质会含有许多成分，例如，高蛋白，如果直接用甲醇定容，效果不是很好，不过还是要由分析的物质决定。

12、二元泵柱塞杆串联和并联有什么区别，哪种更好？
答：二元泵柱塞杆串联有串联模式，但现在实验室里大部分二元泵都是并联模式的。

13、老师，泵压会随气温变化影响吗？
答：我们知道温度越高，流动相的粘度就会越低，因此，系统压力会相应的减小。

14、用硝酸清洗流通池的时候，怎么能不经过泵啊？怎么操作的啊？
答：可以利用注射器吸取35%的硝酸溶液，将硝酸溶液直接打进流动池。

15、手动进样，定量环20微升 怎么进5微升？
答：无论是手动进样还是自动进样，定量环只有两种进样方式：满环进样和半环进样。所以，可以进20微升，也可以进10微升，甚至更少。

16、安捷伦液相1290的进样量最大是多少？
答：安捷伦1290在不增加定量环的情况下，通常是20微升。

17、老师，请问流动性ph用醋酸调2.85这个要怎么操作？
答：可以利用pH计进行调节，在调节过程中，流动相中最好不要有甲醇、乙腈等有机相，否则会对pH调节造成影响。

18、反接冲洗之后是不是只能反着用了？
答：不是的，反接冲洗的目的只是疏通堵塞的柱头，洗出污染之后，只要压力正常，也可以正着使用。

19、含量测定要求进5微升，实际进20微升，会影响含量测定结果吗？
答：含量测定是与标样进行对比的，如果标样也是进了20微升，对测定结果是没什么影响的。

20、正相色谱柱的保存方法？
答：正相色谱柱与反向色谱柱一样，都会保存在有机相里。

       文章来源： 实验与分析

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