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如何选择培养基、培养温度和培养时间?

EM(环境监测)检测中培养策略对细菌和霉菌回收的影响


微生物EM(环境监测)检测中最常遇到的问题之一与培养策略和培养基的选择有关。


使用一种培养基(TSA)或者两种培养基(TSA和SDA),使用单个温度、两个温度,是否从低温到高温,还是高温到低温。影响微生物回收率的因素有:结果观察时间(单一温度通常比两个温度早)、成本(只用TSA比使用TSA+SDA便宜)以及微生物回收率的高低。很少有研究报告回收率相关的培养条件选择,但是,已有报告单一温度条件30-35℃培养对于霉菌回收的不如两个温度培养的好。下面的数据总结了在我们实验室进行的一项小研究。


采用标准TSA LP80培养基、分别使用30-35℃@5天、25-30℃@5天、20-25℃@72小时+30-35℃@48小时3种方案进行评价。以SDA培养基20-25℃@5天条件为对照,对霉菌的回收情况进行评价。


这些样本是从生产车间入口附近的非受控区域采集的,以确保足够高的计数以获得合适的数据大小。在每个地点取3个表面接触皿和1个浮游菌(1立方SAS180),每天取12个点。每个点取3组重复样本,每个培养温度测试1组样品。实验2中还收集了SDA样本。样本分别在12月至1月,以及9个月后的8月至9月采集,以覆盖季节变化。培养后对每组样品进行计数,以确定菌落计数。在实验2中,三位分析员还计算了每个组的霉菌菌落数,并计算了每个样本的平均值。



图1。在试验1的3天内,在每种培养策略下检测到的细菌菌落总数


图2。在试验2的8月至9月的3天内,在每种培养策略下检测到的细菌菌落总数


总的来说,25-30℃的单一温度日变化最小,可能比其他2种方法回收了更多的菌落。这种类型的测试存在相当大的差异,因此需要研究更大的面以获得更可靠的数据集。


Mold detection

霉菌检测


在整个试验过程中,每个试验点霉菌菌落的发生频率都被记录下来。结果如图3所示。正如我们所看到的那样,SDA(22.5℃)回收了大部分的菌落,组合温度(25-30℃+30-35℃)次之,然后是25-30℃,最后是30-35℃。在30-35℃条件下,回收率小于SDA(22.5℃)的1%。

 

图3.在3天的试验中,每种培养策略检测到的霉菌菌落总数


Conclusion

总结


如果成本是驱动因素,那么单一培养基,组合温度培养(从低到高)的TSA是最佳选择。如果速度是主要的要求,那么25-30℃的单一温度是最好的。如果需要全部回收,那么优选2种培养基,TSA和SDA。





       文章来源:允咨GMP制药技术

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