【纯干货】抗体/抗原的固定化策略

所需溶液
A液：0.001M HCl、0.5M NaCl，调节pH 3.0，4-8℃保存（A液使用前要进行预冷处理）。
B液：0.2M NaHCO3、0.5 M NaCl，调节pH 8.3（如果要偶联的生物分子为IgG时，pH=8.5-9.0），室温保存。
C液：0.1M Tris-HCl，调节pH 8.3，室温保存。
D液：0.05M Tris-HCl、0.5M NaCl，调节pH 8.5，室温保存。
E液：O.05M 甘氨酸、0.5M NaCl，调节pH 3.5，室温保存。
F液：1.0M NaCl，室温保存。
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1
预活化介质的清洗
取适量的预活化介质CNBr Focurose 4FF 1ml（也可用NHS Focurose 4FF)用5倍体积的A液将介质重悬，5min后将溶液抽干。重复此步骤5次。
备注：此步骤用于激活介质，要保证A液的清洗体积要充足、清洗时间固定在0.5h左右（时间太久介质上面的基团会水解）
2
配基溶液的制备
将要偶联的生物分子（如Protein A/G等）用B液溶解或者将生物分子置换到B液中（生物分子浓度为1-10mg/ml,建议为5mg/ml）。
备注：确保偶联时的pH和盐浓度与B液一致，避免其它因素对偶联过程的影响。
3
配基的偶联
将清洗完的介质和准备好的样品按等比例（体积比）混合，室温条件下温和混匀3-4h。确定偶联成功（通过测定偶联前后生物分子含量确定偶联效率）后，将溶液抽干。
备注：偶联建议在室温条件下偶联3-4h。对于不稳定的配基，建议4-8℃偶联过夜。
4
偶联后清洗
用5倍体积的C液将偶联后的介质重悬，再将溶液抽干。再重复此步骤3次。
备注：此步骤用于清洗介质中残留的生物分子，清洗要彻底。
5
活性基团封闭
用5倍体积的C液进行重悬，室温条件下温和混匀3-4小时后，将溶液抽干。
备注：此步骤用于封闭介质上面的活性基团，室温条件下温和混匀3-4小时即可。
6
清洗
用5倍体积的D液将封闭后的介质重悬，5min后将溶液抽干；再用5倍体积的E液将介质重悬，5min后将溶液抽干。重复此步骤3次。
备注：此步骤用于酸碱清洗掉偶联不够紧密的生物分子
7
保存
用5倍体积的纯化水将介质重悬后抽干，再用5倍体积的20%乙醇将介质重悬后抽干，最后用20%乙醇浸泡保存。
备注：此步骤用于保存介质，避免微生物生长。

       文章来源：允咨生物GMP学苑

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