蛋白质纯化技术之沉淀法- 等电点沉淀和亲和沉淀法

一、等电点沉淀法

等电点沉淀的原理:两性电解质在溶液pH处于等电点(pl) 时，分子表面静电荷为零，导致赖以稳定的双电层及水化膜的削弱或破坏，分子间引力增加，溶解度降低，从而相互聚集，沉淀析出。利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定性，不然盲目使用十分危险。不少蛋白质与金属离子结合后，等电点会发生偏移，故溶液中含有金属离子时，必须注意调整pH。等电点法常与盐析法、有机溶剂沉淀法或其他沉淀方法联合使用，以提高其沉淀能力。

表3-2列举了几种酶和蛋白质的等电点。

二、亲和沉淀法

将亲和试剂加人到含有靶蛋白的混合溶液中，就可以形成亲和配体-靶蛋白的共聚物。这种共聚物可以在一定条件下形成沉淀，通过过滤或离心的方式进行分离，然后将酶或蛋白质从亲和配体-聚合物上解离下来。这一过程类似于蛋白质的亲和层析,因此将这种分离提纯蛋白质的技术称为亲和沉淀。以脱乙酰几丁质作为例，可以说明亲和沉淀法分离蛋白质的基本原理与过程(图3-5)。

这种利用亲和沉淀分离蛋白质的方法同传统的蛋白质分离技术相比，可以显示出亲和沉淀的优越性:

①它可以直接处理包含有细胞壁碎片的黏滞溶液，加入亲和性聚合物形成可溶性亲和配体复合物后,通过离心除去颗粒性物质,然后改变一定条件， 使聚合物-靶蛋白共聚物发生沉淀。

②亲和沉淀在分离靶蛋白的同时，可以将之浓缩成较小体积，减少了后续分离的工作量，节约了化学试剂，因而更经济有效。

③可进行多级亲和沉淀，如果样品液中还包含.

其他有用的物质，可以使用另--种亲和沉淀剂或改变纯化策略加以分离提取。

       文章来源：CROU制药在线

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