【问题解答】辅助设备类

Q 1：高压灭菌锅验证，由于设备没有验证孔，温度分布怎么进行？有线可以验证么？ 

解答：

高压灭菌锅一般没有验证孔，腔室也没有冗余的孔洞，灭菌锅的验证常使用无线温度探头。

能否使用有线温度验证仪，需评估一下是否可以从锅盖密封圈引线，如锅盖密封过程存在热电偶极易损坏的风险，建议不要采用有线温度验证仪。

理由：

N/A

参考：

N/A

Q 2：成品常温库和原辅料阴凉库的温湿度分布验证，是否需要做断电确认和开门确认？温湿度检测仪布点可以依据什么？

解答：

有温湿度控制要求的成品常温库和原辅料阴凉库受季节影响较大，通常进行冬季和夏季温湿度分布验证时进行断电确认和开门确认。

对于库房与其门外区域公用一套空调系统的情况，库房内外温湿度相同，开门可能不会影响温湿度变化，此时开门测试意义不大。

理由：

断电测试确认库房的保温能力，当库房内外温湿度差异较大时，库房断电会影响库内温湿度变化，甚至超出可接受范围。

开门测试为日常操作提供合理开门时间参考值。当库门内外温湿度存在差异时，开门会影响库内温湿度改变，甚至超出可接受范围。

参考：

WHO TRS 961, Annex 9, Supplement 7: Qualification of temperature-controlled storage areas

WHO TRS 961,Annex 9,Supplement 8: Temperature mapping of storage areas

Q 3：温度验证用设备一般分两种：有线温度记录仪的和无线温度记录仪，两种探头使用时是否都需要进行前后校准？

解答：

为证明测试用温度记录仪在测试过程中数据采集准确，通常进行使用前的校准及使用后的确认。

对于有线温度记录仪，一般都均有探头使用前的校准功能和使用后的确认功能。前校准和后确认的周期可以通过评估确定，校准周期如每天使用前后进行、每周使用前后进行、每3遍测试前后进行、每9遍测试前后进行等。

对于无线温度记录仪，也应进行使用前的校准及使用后的确认。有些厂家的产品能够实现探头的前校准及后确认活动，如KAYE无线温度验证仪。有些厂家的产品没有前后校准功能，此类仪器除了进行年度计量，尽可能在使用前后进行温度对比测试，确认温度记录仪使用过程采集点数据准确可用。温度对比测试如使用校准过的油浴或其它温度场。

理由：

温度验证用探头经常在不同温度环境下使用，测量数值存在漂移现象，测试过程可能会出现偏差，为保证测试过程的数据采集准确可能，通常进行使用前的校准及使用后的确认。

参考：

N/A

Q 4:做BD程序的时候温度要求是121℃还是134℃，设备供应商说根据灭菌温度制定，但BD的说明书是134℃？

解答：

BD测试一方面可以反映空气的排除效果，另一方面可以一定程度上反映出进入到内室的蒸汽的质量。进入到灭菌柜的灭菌阶段是蒸汽进入室加压，穿透，灭菌的过程，121℃和134℃的程序在表面参数设置上只有温度和压力不同，参数背后还有其他设定，比如：补气速率，排水频率，加套温度，蒸汽散流板散流方式，以及补气触发温度等综合作用完成。这些隐含的参数不一定是相同的，所以这两个不同温度的灭菌可以认为是两个程序。所以建议使用哪个温度灭菌就用哪个温度段的BD包。

理由：

由于不是唯一的参数标准，所以不能孤立的回答BD程序应该是121℃或者134℃，需要充分考虑待灭菌物品的灭菌温度要求和BD包的说明书，需要根据产品灭菌要求购买合适的BD包。

参考：

N/A

Q 5:隔离器灭菌过氧化氢浓度一般要多少，灭菌彻底？

解答：

因VHP灭菌受通风循环比例、温度和湿度的影响，通常需要供应商来进行灭菌工艺开发（可能处于技术保密的原因，不同的供应商对浓度没有明确的告知），通常在200-300ppm就能达到灭菌效果。我们做过的有400ppm的，也有要求125ppm，最终都能达到灭菌的效果。这就和灭菌时温湿度等参数有关了。

理由：

VHP灭菌效果并非仅仅与其浓度有关，还受环境温度，湿度等影响，所以不能单纯的只对浓度一个限定值来保证灭菌的有效性。

参考：

N/A

Q 6:除菌过滤器的再验证周期一般多长时间？

解答：

在最开始选择滤芯的时候，随着相容性、溶出、截流能力等确认时，也应该已经做过确定使用次数的确认，一般都用来作为首次确认，这是作为过滤参数的主要参考依据，日常的泡点测试或者水侵入测试可以及时反馈过滤器的状态，如果没有相关的变更且定期都有供应商审计的话，可以不做再验证了，因为指南里没强制要求。但是条件允许，还是建议通过风险评估确认下过滤系统中等级较高的项目，定期验证下过滤系统的安全性还是有必要的。

理由：

完成过滤工艺的验证之后，还应当定期评估产品性质和工艺条件，以确定是否需要进行再验证。产品、过滤器、工艺参数等变量中任何一个发生改变，均需要评估是否需要再验证。根据评估结果，以决定是否需要开展再验证，无明确的法规规定再验证周期。

参考：

NMPA 除菌过滤技术及应用指南

Q 7:存放菌种斜面2℃到8℃，一般放普通冰箱的冷藏室，这个精度有些难达到0.5℃的波动，有些培养箱的温度波动也比较大一点，也是严格按这个文件吗？

解答：

如果有明确的冷藏温控要求，一般不建议使用普通冰箱，建议使用医用冷藏箱，控温精度高。如果使用的箱体温度波动较大，需评估对存储的物品的影响。

理由：

根据工艺需求来选择合格的设备，有些不适用的设备可能无法达到工艺需求。

参考：

N/A

Q 8:在进行配制罐灭菌验证时选用什么样的生物指示剂？

解答：

不使用 MesaStrip 的孢子条，包装容易湿，孢子有泄露到罐体里的风险。推荐使用自含式BT20，空载，或者安瓿瓶指示剂BT22，空载满载都适用。滤纸片的孢子条一般用于环境熏蒸。

理由：

选取生物指示剂需要考虑物理化学性质的适用性以及操作上的适用性，对于不用种类都适用的指示剂建议选择不容易产生污染风险的款式。

参考：

PDA TR 61 在位灭菌 2013

GBT 19972-2018

医疗保健产品灭菌 生物指示剂选择、使用和结果判断指南，2018年10月01日实施

Q 9:在仓库或一些控温设备（干燥箱、冰箱）的OQPQ时，会做空载及负载的一段时间温度分布，比如冷链新国标GBT34399，要求采集时间不少于48小时。这个48小时是重复三次，48*3；还是只要一次就好了？

解答：

国标GB/T34399中并没有要求重复测试，数据采集时间不少于48小时，如进行72小时或连续7天。具体的测试时间还应根据设备/库房具体的运行情况确定（如：程序设定在控温过程中需多台机组交替运行，测试时间则需至少覆盖该运行程序的整个过程）。

理由：

N/A

Q 10:做穿透的时候每个热电偶都进行穿透，每个穿透的物品都放指示剂吗，还是只放冷点位置？

解答：

满载时需要验证的指标有热分布和热穿透及生物指示剂挑战，热分布需要使用的探头数量指南中有举例，热穿透的数量要根据你的装载方式来评估需要用多少个热穿透探头，不同的装载方式评估的结果不同，热穿透探头的数量也不同，这个数量没法固定。认为有风险的位置就放。一般测试时热穿透的位置会一同放生物指示剂。

理由：

周期设定和确认过程中，生物指示剂在产品和装载中的放置位置，应当是对灭菌过程最严格挑战的地方，指南建立常规测试中把生物指示剂放在过程挑战装置中，可作为参考，常规执行测试过程一般是指示剂位置和测试探头数量和位置保持一致。

参考：

GBT 19972-2018

医疗保健产品灭菌 生物指示剂选择、使用和结果判断指南，2018年10月01日实施

Q 11:做稳定性实验箱验证的开门实验，门打开一分钟后湿度就从60％降到30％，超出规定范围，一般关门半小时能恢复。所以开门实验还有必要做吗，怎么定可接受标准合适呢？

解答：

开门测试考虑两方面：

1.开门后温湿度超出可接受范围的时间，

2.关门后温湿度恢复到可接受范围的时间，

通过开门测试，研究合理的开门时间及两次开门的时间间隔。开门测试可以没有具体的标准，测试结果仅对设备使用提供参考值。

理由：

断电开门实验只是给日常使用提供一个参考值，这个过程和数值是参考验证的结果得出来的。

参考：

N/A

Q 12:干热灭菌柜的侧高效压差，工作室压差以及进风口压差有没有标准规定？

解答：

GMP规定：“干热灭菌时，灭菌柜腔室内的空气应当循环并保持正压，阻止非无菌空气进入。进入腔室的空气应当经过高效过滤器过滤，高效过滤器应当经过完整性测试。”

压差范围没有明确标准，压差范围应参考设备供应商的设计资料。

理由：

N/A

参考：

N/A

Q 1３:灭菌柜验证，3M，BD试验包说明书上写132-134度3.5分钟，但是我们灭菌柜灭菌不带小数点，只能设3分钟或4分钟，怎么办？

解答：

应按照说明书建议时间进行BD测试，灭菌柜计时一般采用秒为单位，3.5分钟即为210秒。

理由：

需要根据产品灭菌要求购买合适的BD包，具体的时间以说明书为准，以秒为单位。

参考：

N/A

Q 1４:无菌灌装设备PQ验证中有必要进行无菌检查吗？因为后面还会做培养基模拟灌装对整条线的无菌性进行检查。

解答：

不是必须要做，PQ主要关注设备性能，如灌装装量、踢废功能、A级层流送风性能。

理由：

设备的PQ考察的是设备的性能，无菌保证以培养基模拟灌装和后续的工艺验证来确保。

参考：

GMP实施指南 2010版 无菌药品

Q 15:灭菌柜的平衡时间必须要符合EN285吗？器具灭菌呢？都是过度灭杀吗？

解答：

平衡时间满足要求能证明装载中冷空气去除能力和加热能力，如平衡时间达不到要求，建议进行灭菌程序的开发，如改变装载方式、增加脉动次数、改变脉动上下限等措施。通过评估器具的耐热性选择合适的灭菌方法，平衡时间针对的是多孔/坚硬装载，器具的耐热性较强，一般采用过度杀灭法。

理由：

是否需要过度灭菌需要结合产品和被灭物品的特性来决定，对于器具类的一般过度灭菌是比较保险且风险较低的做法。

参考：

PDA TR No.1湿热灭菌工艺验证：循环设计、研发、确认和持续控制-2017

Q 16:无菌灭菌验证f0是多少合适？180度的干热灭菌柜的Fh值多少是被接受的？

解答：

对于湿热灭菌耐热的装载，欧盟及中国常采用15分钟，FDA采用12分钟；不耐热产品的灭菌，通过研究装载的生物负荷及耐热性，设计灭菌F0标准。中国药典规定，干热灭菌条件一般为（160〜170℃）X120min以上，(170〜180℃)X60min以上或 250℃X45min 以上，也可采用其他温度和时间参数。干热灭菌FH值一般大于170℃60分钟。

最新欧洲药典的征求意见5.1.12针对注射剂生产的材料除热原给了更新征求意见，提到常用的干热循环除热原需要在250℃下至少30min，也可以与其他温度如170℃和相应的时间结合，另外对内毒素的回收率有要求最少减少3个对数值，如果内毒素数回收率低于100%,需要对内毒素数量进行相应调整。

最新的USP 1228.1《干热去热原》部分针对去热原也有了相应的更新。不再要求250℃×30min的去热原参数，也不再要求内毒素下降3个log，USP定义的去热原工艺标准为内毒素含量≤0.1EU。

理由：

针对各国各机构的要求求同存异，宗旨是一样的，就是要确保无菌保证性。具体接受标准和参考也要考虑自己的认证机构目标。

参考：

PDA TR 01 Validation of Moist Heat Sterilization Processes:Cycle Design, Development,

Qualification and Ongoing Control，2007

PDA TR 03 Validation of Dry Heat Processes Used for Depyrogenation and Sterilization，2013

Q 17:灭菌时空载温度分布均匀性，是从设备自身探头达到验证温度即开始计算还是怎样，因为灭菌器国标是要在达到验证温度后半小时开始计算？

解答：

温度分布验证计时与灭菌柜灭菌段计时要保持一致，研究整个灭菌阶段的温度均匀性。

理由：

温度分布均一性好坏判定是在达到灭菌温度后根据程序设定的时间要求结束后根据各点的温度衡量各点的均一性，具体灭菌程序时间并非限制在半小时，国标也未提到半小时这一描述，要求是灭菌维持阶段同一时刻最大温差不大于2℃。

参考：

EN285 Sterilization Steam Sterilizers Large Sterilizers-2015

GB 8599-2008 大型蒸汽灭菌器技术要求（自动控制型）

Q 18:新冷库投入使用，是空载满载的分别做48小时可以了是吗？不用说满载做3次48小时吧？

解答：

国内标准，中国GSP规定温度测试需48小时，过国外认证，推荐72小时。WHO的技术报告提到对于能够进行温度控制，不直接受外界环境影响的区域可进行连续72小时监测，对于不能主动控制温度，完全凭借外界环境的系统需要连续7天监测。

因此，不需要连续3次，48小时已经足够了。从出发点来说，连续3次是考察测试结果的重现性，避免偶然性结果。对于间歇运行设备来说，可以连续运行3次进行测试。对于连续运行设备/系统来说，一般推荐连续3个代表性周期（如：24小时×3=72小时）。对于48小时，是相关法规指南作的规定，是已经考虑了重现性的因素在内的。

理由：

对于冷库的温度分布要求法规是比较明确的，可以参考具体国内外要求，对于常温库和阴凉库等非冷库，没有强制要求，可参考GSP要求和产品特性进行确认验证持续时间。

参考：

中国，良好的经营管理规范(GSP) 附录-验证管理-2016 .12.26 

WHO Technical Report Series, No. 961, 2011，Annex 9: Model guidance for the storage and transport of time and temperature–sensitive pharmaceutical products

Q 19:湿热灭菌柜验证，设定温度为121摄氏度，验证过程中所有温度都在122度以上，请问这种情况需要写偏差吗？

解答：

不同法规对温度分布规定的范围不同，如果验证的温度范围超出你所规定的接受标准就算偏差。

理由：

常见法规指南要求，比如EN285-2015版第8.2.1.1部分要求接受标准是最低温度要求的上限+3也就是121-124℃，所以验证过程温度都在122以上，如果都在121-124的范围内的话，还是符合要求的，如果企业有自己更严格的内控标准，也需要考虑。

另外国内的灭菌器的GB5.8.3.1也提到灭菌温度翻译要求下限为灭菌温度，上限应该不超过灭菌温度3℃。

另外衡量灭菌成功与否除了温度要求外，还有更重要的指标就是F0值，需要根据工艺需求全面考虑。

参考：

EN285 Sterilization Steam Sterilizers Large Sterilizers-2015

GB 8599-2008 大型蒸汽灭菌器技术要求（自动控制型）

Q 20:灭菌柜121度热分布验证合格，115度放同样的位置温度不合格，最高到119，普遍超高，然而设备腔体内移动探头温度合格，最高117多，是怎么回事？

解答：

1.首先看腔室内压力和夹套压力设定值，如果腔室内压力过高，腔室内温度会偏高，如果夹套压力明显高于腔室压力的话，腔室内也会产生过热，温度也会偏高。

2. 如果腔室及夹套内压力设定值合理，考虑PID调节阀的开度及关度，可能在灭菌段开度过大，一般厂家在出厂前设定好此参数，但不一定合理，最好在灭菌程序开发阶段确定此参数。

理由：

温度大小和压力有一定关系，不同温度下压力的影响也是不同的，所以121℃合格的情况下，115℃不合格也是可能存在的。需要考虑压力对温度的影响。

参考：

TR No.1 湿热灭菌工艺验证：循环设计、研发、确认和持续控制-CHN-2007

Q 21:做灭菌柜验证的时候，三次验证的灭菌柜最冷点如果不在一个地方,如何确定最冷点？

解答：

灭菌柜装载的冷点应固定一致，如果在验证过程没有发现明确的冷点，可以考虑把热穿透F0值较低的几个点位进行分析，如果F0相差很小，考虑将F0值较低的几个点定义为冷点。

理由：

灭菌柜三次验证的冷点如果不固定，应首评估原因如：设备设计是否合理，如蒸汽散流、装载准备及摆放是否一致、热穿透布点位置是否一致、程序起始温度是否相差较大、蒸汽质量是否稳定、如分析后无明确原因，再考虑将F0值较低的几个点作为冷点。

参考：

N/A

Q 22:关于灭菌柜再确认，多种装载是否需要在再确认时均执行，还是可以评估最差条件（首次均已做）？

解答：

针对不同种类的装载方式，每种装载方式再验证一般每年至少一次，不建议减少验证工作量。针对同种装载的不同装载大小，比如 满载/半载/最小装载，首次如果全部经过验证的话，再验证假如想减少装载方式测试，需要经过风险评估确保受控。再验证周期一年的举例适用于无菌产品器具等灭菌，不适用于灭废等其他种类灭菌柜。

理由：

装载方式是在程序开发阶段确定的，且各装载程序之间没有必然的包含关系，首次验证后针对不同的装载和程序需要逐一进行再确认。

参考：

EU GMP附录1 无菌药品生产-2017征求意见稿

       文章来源：允咨GMP制药技术培训

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