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如何分离和培养脐带来源的间充质干细胞?

如何分离和培养脐带来源的间充质干细胞?...

 

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分离和培养脐带来源的间充质干细胞(UCMSCs)是一个涉及多个步骤的过程,主要包括组织的获取、细胞分离、培养和扩增。以下是详细的步骤: 在生物安全柜中,从50 mL离心管中取出脐带,并将其转移到10 cm细胞培养皿中;使用无菌手术剪将脐带尽可能剪碎,确保碎片不超过1 mm大小;通过物理方法(如剪切和研磨)将脐带组织中的细胞从基质中释放出来;使用适当的酶(如胶原酶和透明质酸酶)处理,以进一步分解组织结构,释放出细胞;将处理后的脐带组织或细胞悬液接种到含有适宜培养基(如含10%胎牛血清的DMEM/F12)的培养瓶中,置于37°C、5%CO2的培养箱中培养;由于间充质干细胞具有贴壁生长的特性,通过贴壁培养可以实现细胞的纯化和扩增;当细胞密度达到80-90%时,进行传代培养,即从原代培养瓶中取出细胞,并重新接种到新的培养瓶中,继续培养;定期观察细胞形态,确保细胞健康生长。使用流式细胞术分析细胞表面的特异性标志,如CD29、CD44、CD166等,以确认细胞为间充质干细胞。通过上述步骤,可以从脐带中成功分离和培养出间充质干细胞,这些细胞可以用于进一步的实验研究或临床应用。

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