扫一扫 添加小助手
服务热线
13818320332
扫一扫 关注我们
请登录后观看...
介绍：
1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；3. 离心， 1000rpm，5min；4. 弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养；5. 次日更换一次培养液，继续培养。
细胞复苏是与细胞冻存相反的过程，即是细胞恢复生长的过程，是将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养。当恢复到常温状态时，细胞的形态结构保持正常，生化反应即可恢复。与细胞冻存不同，细胞复苏过程升温要快，防止在解冻过程中水分进入细胞，形成冰晶，影响细胞存活。
主要步骤：
①将冷冻管从液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，细胞融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率，复苏过程中一般细胞死亡率在20%～25%之间。
②迅速用酒精棉球擦拭冷冻管外部杀菌消毒，然后放置在冰浴上。
③小心开启瓶盖，把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中，然后把培养瓶移至培养箱，36℃～38℃培养1h，让细胞贴壁。
④细胞贴壁后，小心移弃培养基，主要是去掉DMSO(悬浮生长细胞要通过离心沉淀除去DMSO)、死细胞及其碎片，加5mL新鲜培养基，36℃～38℃培养。
⑤细胞培养24h后，更换新鲜培养基，继续培养直到形成单层，便可以传代。
⑥详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等。
结果分析：
判断细胞复苏成功与否，需要看复苏后细胞贴壁率及细胞存活率（细胞存活率将冻存管内剩余的细胞，用台盼蓝染色法检测复苏细胞的存活率。呈蓝色的细胞为死细胞，活细胞不着色。用细胞计数板和计数器计数细胞，得出细胞存活率）。如果复苏后95%以上的细胞贴壁，而且细胞的活性好，这就说明细胞复苏的过程没有问题。复苏的细胞恢复到正常生长，达到正常的生长特性(比如细胞群体倍增时间等)后要再冻存以补充细胞储存数量。
注意事项：
1、注意无菌操作。
2、应在1-2min内使冻存液完全融化。如果复温速度太慢，则会造成细胞损伤。另外，细胞复苏后的操作最好在4℃冰浴中进行，以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。
3、细胞复苏过程中，升温的速率要大，把从液氮或-70℃冰箱中取出的细胞在最短的时间内放入水浴锅。
4、细胞放入水浴中注意用镊子夹住细胞冻存管并在水浴中不时晃动，使其受热均匀，并防止水浴时水进入细胞冻存管污染细胞。打开细胞冻存管之前要用酒精棉球将冻存管消毒并晾干。
5、液氮操作有一定的危险性，打开液氮罐取出细胞时，戴上防护眼镜。
6、如果冻存管密封不严，液氮可被吸入。由于解冻时冻存管中的气温急剧上升，将可能发生爆炸。复苏过程中应盖上恒温水浴锅的盖
1. 本平台部分内容为原创，相关版权归本平台所有，仅供注册用户观看，如未经许可，禁止拷贝、录屏、反向工程、技术下载等手段非法获取；
2. 本平台旨在为行业提供资源分享空间，由第三方用户转载分享的免费内容，本平台不对其内容的版权归属负责，如有版权问题，请联系第三方用户删除，或者请联系平台客服协助处理。
