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从全血中获取白膜层的方法主要包括以下几个步骤:首先确保使用的是抗凝全血;将全血与等体积的推荐试剂(如Ficoll-Paque™或Lymphoprep™)混合,轻轻混合。在室温下,以800 x g的离心力离心10分钟。离心过程中,离心速度应缓升缓降,以避免细胞损伤;离心后,可以观察到管中形成明显的分层。上层为血浆和密度梯度介质,下层为红细胞和粒细胞,中层为淋巴细胞和单核细胞组成的白膜层。使用移液器在密度梯度介质和红细胞层之间插入,轻轻吸出白膜层细胞;将白膜层细胞转移到新的离心管中,使用磷酸盐缓冲液(PBS)或等渗溶液稀释,离心后弃上清,重复此步骤至少两次,以去除残留的密度梯度介质和红细胞;最后一次离心后,将细胞重悬在含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中,计数细胞并检查活力;对于需要大量处理的情况,可以使用自动化处理平台如Tecan Freedom EVO平台,这可以提高处理效率并减少人为错误。通过上述步骤,可以从全血中有效且经济地分离出白膜层,用于后续的实验分析或细胞分离。
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