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单细胞冻存复苏实验操作过程主要包括以下几个关键步骤：1.细胞准备：选择处于对数生长期的细胞，进行常规的细胞培养和细胞计数；配制含有保护剂如二甲亚砜（DMSO）或甘油的冻存液。这些保护剂有助于保护细胞在低温下的完整性。2. 细胞冻存：将细胞从培养瓶中收集到离心管中，使用适当的细胞处理方法如胰蛋白酶处理，确保细胞从培养基中分离出来；将配制好的冻存液加入到细胞悬液中，混合均匀，确保细胞充分接触保护剂；使用程序降温设备，如程序降温盒或免液氮程序降温仪，按照设定好的降温曲线进行降温，确保细胞在冷冻过程中受到最小伤害。3. 细胞复苏：从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中，不断摇动以加速解冻过程，确保细胞外部的冰晶迅速融化，避免对细胞造成损伤；解冻后，将细胞离心，去除含有DMSO等保护剂的培养液，然后更换为新鲜的培养液；对细胞进行计数，调整细胞密度，然后将其转移到培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养，以促进细胞的恢复和生长。 通过上述步骤，可以有效地进行单细胞冻存和复苏实验，确保细胞的活力和功能不受影响。

视频来源：帕诺米克

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