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细菌革兰氏染色操作方法是一种常用的细菌鉴别方法，它根据细菌对特定染料的保留能力不同，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。

以下是详细的操作步骤和注意事项：

1. 将细菌涂布在干净的载玻片上，涂片不宜过厚，以避免细菌重叠，影响脱色效果；涂片后，将载玻片在酒精灯上固定，通过火焰1-2次，确保细菌固定，但注意不要过热，以防玻片烫手。

2. 使用结晶紫染色，时间为1分钟，然后用水洗去多余的染料；使用碘液，染色时间同样为1分钟，用水洗去碘液；使用95%的酒精进行脱色，这一步骤是革兰氏染色的关键，需要严格控制时间，一般为20-60秒，以达到最佳脱色效果；使用蕃红或其他红色染料进行复染，时间为1分钟，然后用水洗去多余的染料。 

3. 染色结束后，将载玻片在显微镜下观察。革兰氏阳性菌通常保留结晶紫的颜色，而革兰氏阴性菌则会被脱色，显示为红色；根据细菌的染色特性，可以初步判断细菌的类型，这对于后续的微生物学分析非常有用。

通过这些详细的步骤和注意事项，可以有效地进行细菌的革兰氏染色，从而为细菌的鉴别和分类提供重要依据。

视频来源：健微讲堂

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