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SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离技术。在进行SDS-PAGE实验时，配胶是一个关键步骤，需要精确操作以确保凝胶的质量和后续实验的成功。以下是SDS-PAGE配胶的基本操作流程：1. 准备材料：聚丙烯酰胺（Acrylamide），双丙烯酰胺（Bis-acrylamide），Tris-HCl缓冲液，SDS，过硫酸铵（APS），TEMED（四甲基乙二胺）。穿戴实验服、手套和护目镜，因为聚丙烯酰胺是神经毒素。2. 配制分离胶 ：根据需要分离的蛋白质分子量大小，选择合适的聚丙烯酰胺浓度（通常为5-20%）。 在100 mL Tris-HCl缓冲液中，根据计算的比例加入Acrylamide和Bis-acrylamide。加入适量的SDS以确保蛋白质在电泳过程中的均匀带电。加入APS和TEMED，轻轻混匀后立即倒入制胶模具中，插入梳子，静置待胶聚合。3. 配制浓缩胶：与分离胶类似，但通常使用较低的聚丙烯酰胺浓度（如4%）加入SDS，APS和TEMED，轻轻混匀后倒入分离胶上层，插入梳子，静置待胶聚合。4. 装载样品：将蛋白质样品与加样缓冲液混合，加热变性。待胶完全聚合后，拔出梳子，小心加载样品到孔中。5. 电泳：向电泳槽中加入电泳缓冲液，确保覆盖整个凝胶。 连接电源，根据凝胶大小和电压设定电泳时间。6. 结果分析：电泳完成后，取出凝胶，进行染色和脱色处理。使用凝胶成像系统观察和记录蛋白质条带。注意事项：操作过程中避免气泡进入胶体中。使用新鲜配制的APS和TEMED，以确保胶的聚合效果。注意安全，避免直接接触聚丙烯酰胺和SDS。通过以上步骤，可以成功配制和运行SDS-PAGE凝胶，用于蛋白电泳分析。

视频来源：生物化学online

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