HPLC外标法进行含量测定时有哪些注意事项

1、HPLC法应用于含量测定时需要注意的问题
在建立一个新的HPLC法含量测定方法时，方法建立以及方法学验证方案需要特别考虑下述多种因素对分析结果的影响。

（1）流动相缓冲盐的pH值
流动相缓冲盐的pH值对药物的保留行为有影响，甚至会显著改变某些碱性药物的保留行为。见下图1，当流动相中缓冲溶液的pH为3.0时，出峰顺序为利多卡因、苯甲酰胺、酮洛芬，当流动相中缓冲溶液的pH为10.0时，三种药物的出峰顺序为酮洛芬、苯甲酰胺、利多卡因二即使是梯度洗脱，流动相中缓冲溶液的pH值仍然对药物的保留行为产生影响。

图1 流动相pH值对保留时间的影响

(2)色谱柱
色谱柱的差异也会影响药物的保留行为，即使是柱长、内径、粒径相同的色谱柱，由于填料性质的差异，药物的保留时间、峰型有时会有较大差异，如图2所示。

图2 化学药物在不同色谱柱上的保留行为

(3)流动相组成
以多元维生素制剂的含量测定为例，某制剂中含有4种维生素：烟酰胺、维生素B6、维生素B2和维生素B1。如图3所示，当流动相中己烷磺酸钠和庚烷磺酸钠的相对比例由1:1变为4:6时，不仅各组分的保留时间、峰形有变化，甚至峰3、峰4没有实现分离。

图3 流动相组成对药物保留行为的影响

2、含量的计算方式
HPLC的定量方法可以分为内标法和外标法。在仪器发展的初期，由于进样重复性差。为了保证测定结果的准确采用内标法较多。随着自动进样装置的发展，进样的重复性已经足够精密，从90年代开始，大部分的内标法已经被外标法取代。

但是，在药典制剂品种中还有一定数量的HPLC含量测定方法采用内标法。除了尚未修订以外，以前担心的进样重复性已经不是采用内标法的原因，主要是因为药品制剂含量测定中样品回收率或样品制备方法的回收率影响，供试品溶液在萃取、离心处理或其他样品溶液制备过程中不能保证样品的完全提取，以及辅料对低含量药物的吸附作用，采用内标法可避免因供试品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。

       文章来源：CROU制药在线

       本网站刊载的所有内容，包括文字、图片、音频、视频、软件等，如非标注为“原创”，则相关版权归原作者所有，如原作者不愿意在本网站刊登相关内容，请及时通知本站，我们将第一时间予以删除。